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實時PCR實驗

實時PCR實驗

簡要描述:
實時PCR實驗(real-time PCR),屬于定量PCR(Q-PCR)的一種,以一定時間內DNA的增幅量為基礎進行DNA的定量分析。定量方式包括定量和相對定量??蓹z測mRNA,microRNA,lncRNA和DNA水平的基因拷貝數變化。

更新時間:2020-11-16

訪問量:679

廠商性質:其他

實時PCR實驗具體方法

1.SYBRGreen法:

在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。

SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖

PCR產物熔解曲線圖(單一峰圖表明PCR擴增產物的單一性)

2.TaqMan探針法:

探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。

二、服務流程

1、引物設計與合成
2、DNA/RNA抽提
3、反轉錄(針對RNA)
4、上機定量分析
三、客戶提供
1、全血、組織或細胞。
2、引物,或由豐核提供。
3、基因信息:目的基因名稱、物種和序列(或GenBank Accession Number)。
四、交付內容
實驗報告:詳細操作步驟
原始數據:溶解曲線圖,擴增曲線圖,ct值

實時PCR實驗服務列表

項目

備注

周期

引物設計與合成

 

3個工作日

提取

RNA提取、miRNA提取、DNA提取

2個工作日

反轉錄

 

2個工作日

qPCR反應

SYBR Green方法,相對定量

2個工作日

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