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    免疫熒光實驗為你講述染色的方法

    發布時間: 2022-07-24  點擊次數: 271次
     
      免疫熒光實驗是根據抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物,再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原(或抗體)。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有熒光素,利用熒光顯微鏡觀察標本,熒光素受激發光的照射而發出明亮的熒光(黃綠色或桔紅色),可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質、定位,以及利用定量技術測定含量。
      免疫熒光實驗技術又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。
      免疫熒光實驗的染色方法:
      1、取出培養有細胞的蓋玻片或glass-bottom培養皿,用0.01MPBS洗2-3遍。
      2、加入0.3%的Tritonx-100,37℃,30rain
      3、加入4%多聚甲醛試問固定30min或冷丙酮4℃固定10min。
      4、正常阻斷血清1:20封閉試問20-30min,抑制IgG的非特異性結合。阻斷血清選擇與二抗同一種屬的正常血清。
      5、去掉正常血清,直接加入一抗,37℃孵育1h或4℃過夜??贵w以0.01mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經試驗而定)。
      6、0.3%TritonX-100洗5min,0.01mol/IPBS洗5min,0.3%TritonX5min,0.01MPBS洗5rain。
      7、加入FITC-二抗或TRITC-二抗,37℃,孵育1h。
      8、0.3%TritonX-100洗5rain,0.01mol/LPBS洗5min,0.3%TritonX5min,0.01mol/LPBS洗5min,用濾紙吸干。
      9、90%甘油(PBS配制)封片。
      10、激光掃描共焦顯微鏡下觀察,或于4℃避光保存。
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